磷酸盐缓冲液(PBS)是一种广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的基础溶液,常用于细胞培养、组织清洗以及作为其他试剂的基础稀释液等。其主要成分包括氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)和磷酸氢二钠(Na₂HPO₄),pH值通常调节至7.4。以下是完整的PBS配制步骤:
材料准备
- 氯化钠(NaCl):8克
- 氯化钾(KCl):0.2克
- 磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·H₂O):0.2克
- 磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O):1.44克
- 蒸馏水:1升
- pH计或pH试纸
配制步骤
1. 称量:精确称取上述所需化学物质。
2. 溶解:将所有固体成分加入到约800毫升蒸馏水中,并搅拌直至完全溶解。
3. 定容:继续加水至总体积达到1升。
4. 调整pH:使用pH计检测溶液的pH值,如果偏离7.4,则通过添加少量氢氧化钠(NaOH)或盐酸(HCl)进行微调。
5. 过滤:为了确保无菌操作,可以使用0.22微米滤膜过滤PBS溶液。
6. 储存:将配制好的PBS置于干净的容器中,并存放在4°C冰箱内备用。
注意事项
- 在整个过程中要保持良好的实验室卫生习惯,避免污染。
- 如果需要更高浓度的工作液,可以根据实际需求调整配方比例。
- 定期检查PBS的有效期及保存条件,确保使用时仍处于最佳状态。
通过以上步骤即可成功配制出适用于多种实验场合的磷酸盐缓冲液PBS。这种溶液因其稳定性和兼容性,在科学研究领域有着不可或缺的地位。